隨著新的熒光技術開發,光激發和操作的方法在活細胞實驗中日益普及,越來越多的研究人員要求在傳統的可見光譜外使用光損傷較小的近紅外光譜。奧林巴斯公司在IX2系列顯微鏡上使用了嶄新的UIS2光學系統,恰如其分地適應了這類要求。這種新型的光學系統有著極高的信噪比,在更寬的波長范圍內消除色差,有著平坦的高透射率。該系統建立了全新的熒光性能標準,不必損傷細胞,就能有效地檢測到微弱的熒光信號,并且優化了多色觀察。IX2倒置顯微鏡能夠在超寬光譜上生成****的高質量圖像,是廣大研究人員進行活細胞觀察的理想選擇。
超高的信噪比,能夠得到*的圖像
嶄新的UIS2物鏡的信噪比優越,高于現有物鏡50%。這種物鏡的新特性還包括精選了低自發熒光玻璃(通過全反射鍍膜和連接材料,顯著減少了自發熒光),提高了數值孔徑,增強了信號亮度。UIS2系統在弱激發光下,能夠有效探測極弱熒光,從而建立了活細胞熒光成像的新標準。
高數值孔徑物鏡,用于熒光成像
用于UIS2系統的兩種新物鏡有:PLAPON60XO,它的數值孔徑為1.42,*適合熒光成像;UPLSAPO100XO,適合所有用途。這兩種物鏡都有很高的熒光信噪比,而且都能夠在45mm齊焦距下有非常好的UV激發效果。 UPLSAPO100XO能夠提供直到340nm的高透過率。

信噪比更高,在熒光觀察時,能夠輸出更明亮、反差更高的圖像
為了*大程度地減小細胞損傷或熒光衰減,理想的顯微鏡應該在*小激發光下進行明亮的、高反差的熒光觀察。為了有效檢測到微弱的熒光信號,必須降低雜散光的噪音。信噪比越高,弱激發光下的觀察圖像越明亮、越清晰。
- 增強信號的方法

①高數值孔徑的熒光物鏡。
②與單獨熒光波長特性相吻合的濾色片
- 降低噪聲的方法

①無自發熒光的物鏡
②使用不產生熒光光譜交疊的激發和發射濾色片組合。
③能阻止雜散光進入的光學系統
④能減少自發熒光的環形狹縫照明
熒光觀察組件
低自發熒光高信噪比物鏡 
①使用人員除了可以選擇PLAPON60XO 物鏡(出色的數值孔徑為1.42),還可以選用大量的其它高數值孔徑的物鏡,這類物鏡自發熒光小,精選玻璃,有助于提高信噪比。
| 物鏡 |
數值孔徑 |
工作距離(mm) |
| UPLSAPO 10X |
0.40 |
3.1mm |
UPLSAPO 20X
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0.75 |
0.6mm |
| UPLSAPO 40X |
0.90 |
0.18mm |
UPLSAPO 60XO
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1.35 |
0.15mm |
UPLSAPO 100XO
|
1.40 |
0.13mm |
| PLAPON60 XO |
1.42 |
0.15mm |
UPLFLN40XO
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1.30 |
0.2mm |
LUCPLFLN 20X
|
0.45 |
6.6 — 7.8mm |
LUCPLFLN 40X
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0.60 |
2.7 — 4mm |
| LUCPLFLN 60X |
0.70 |
1.5 — 2.2mm |
用于熒光蛋白質的高性能熒光組件 
②這一熒光激發塊組件優化了ECFP/EGFP/EYFP/DsRed波長特性,能夠提供高銳利的光譜分割和高透過率,可以讓使用人員快速有效地從熒光蛋白中檢測到熒光。即使在弱激發光下,也能進行明亮觀察,從而減少了熒光衰減,也*大程度地減少了對樣品的損害。
高性能干涉鍍膜熒光激發塊組件 
③由于采用了新的鍍膜技術,激發和發射之間的間隙減少6nm,因此,某些干涉鍍膜熒光激發塊組件的信噪比也提高了。這類熒光激發塊可有多種選擇,其中包括新型的IGA型熒光激發塊組件。
高性能熒光激發塊

新型熒光激發塊中分光鏡的高銳化鍍膜將激發濾色片的交叉減少到*小,并且將激發光的損失減少到傳統模塊的十分之一以下。與光線吸收裝置(可吸收99%以上的雜散光)組合使用,能夠提高信噪比,而不需要任何防止激發光損失的專用設備。
所有熒光激發塊組件都帶有雜散光降噪功能。
④強噪聲的一個來源是非常微弱的激發光(雜散光)不經分光鏡反射就發生透射。IX2系列熒光激發塊組件帶有可吸收99%以上這種雜散光的裝置。

環形狹縫照明裝置,降低了噪聲/IX2-RFRS
⑤自發熒光產生于透鏡中心,導致光噪聲的產生。但是,這種自發熒光可以通過在反射光照明孔徑光闌上放一個環形狹縫來降低。這種環形狹縫只允許激發光通過物鏡孔(信噪比提高1.2到3倍)。這種裝置很容易安裝到IX2-RFAL上,只需要簡單地更換環形狹縫裝置(視場數11),就可以兼容40X、60X和 100X油鏡。

| Illumination |
Normal |
Annular |
| SIGNAL |
408 |
479 |
| NOISE |
36 |
18 |
| S/N |
11.3 |
26.6
|

玻璃反射器捕捉多重染色劑熒光 
⑥多帶分光鏡通常用于在激發和吸收一側使用濾色鏡轉盤時,獲取多重染色熒光樣品的多**像。但這種分光鏡會碰上這樣一個問題,那就是,由于染色劑數目增加,每種熒光圖像都會變暗,這是因為透過光譜變窄,透過率在*好狀態下也要降低到90%以下。因此,奧林巴斯公司開發了與波長無關的世界*的反射器,能夠在從430nm到700nm的寬波長范圍中具有94%的高透過率。與激發和發射一側的濾色鏡轉盤共同使用時,就可以使用多種染色劑,更有效地捕捉熒光圖像。☆ 正在申請**

大量附件,能夠進行各種各樣的熒光成像

熒光照明光源,明亮激發照明,用于細胞觀察/操作
奧林巴斯系列熒光照明裝置適合廣泛的需要,包括多重染色熒光、比例法測量(Ratio)、光漂白及解籠鎖(uncaging)觀察。低放大倍率性能已經大為提高,金屬鹵化物系統帶有預對中的長壽命燈泡選項。
☆1 比起傳統消球差光學元件,能夠更有效集光。
☆2 均勻照明,燈泡聚焦不偏移,即使改變激發光波長。
☆3 由于采用平坦光源光譜,適合多重染色熒光或比例法成像。
多種反射光熒光照明器供選擇
[L形熒光照明器IX2-RFAL]
這種L形照明器比以前產品能夠提供兩倍亮度,帶有可拆卸的孔徑和視場光闌插件,還帶有能準確進行燈室對中的裝置,有著*大的系統靈活性。

[熒光照明器IX2-RFA]
比起以前產品,在低放大倍率下,有著2.4倍的亮度(在10X物鏡下進行比較)。這種照明器對于需要強激發光的用途,或者對于低放大倍率熒光觀察非常理想,內置視場光闌。

[雙光室照明器/IX2-RFAW]
同時使用兩個光源,觀察時可以進行光增強。

[雙燈室附件U-DULHA]
這一適配器允許使用人員同時加裝不同類型的光源,并根據用途交替使用。
IX2-RFA用做反射光熒光照明器。
(光路選擇:100/0,0/100,視場數11)

照明器模塊組件
[方形視場光闌U-RFSS]
這種獨特的光闌允許使用人員在視場內的任何地方控制一個熒光激發區域。例如,光漂白和光毒性能夠僅**制在需要CCD成像的區域,提高了整體亮度,也延長了長時間觀察的細胞的壽命。這種光闌安裝在熒光照明器IX2-RFAL的視場光闌位置。

[針孔光闌IX2-RFSPOT]
這種裝置能夠對熒光樣品提供點狀光照明,對于許多實驗都是很有用的,如FRAP,Uncaging等。
這種光闌安裝在L形熒光照明器IX2-RFAL的視場光闌位置。
* 使用市售針孔板。
紅外CCD適配器
這些低放大倍率CCD適配器安裝在左側光口,覆蓋從可見光到近紅外光的波長范圍。

新的微分干涉(DIC)系統
諾馬爾斯基DIC 顯微鏡的簡單原理
光線穿過特殊媒介(例如,水 )中帶有不同折射率的物質(例如,細胞)時,會產生相差。諾馬爾斯基DIC 利用這種相差增強反差。來自顯微鏡光源的光的波動方向與起偏器(聚光鏡側)的光一致,當其通過聚光鏡側的DIC 棱鏡時,就分為直角正交的兩個束光。分裂距離稱做裂劈間隙。當這兩束光線通過帶有不同折射率(例如,細胞)的媒介時,其中一束會發生延遲;而這兩束光被 DIC 滑板(觀察筒側)和檢偏鏡重組時,干涉效應就會產生反差。這就是諾馬爾斯基DIC 的原理。

奧林巴斯公司已經根據裂劈間隙為各種樣品開發出了理想的DIC 棱鏡。當DIC 反差低時,樣品很難觀察,由于有強烈眩光,高反差也會干擾觀察。因此,奧林巴斯公司開發了三種不同類型的DIC 棱鏡,能夠對各種樣品進行清晰的觀察。
諾馬爾斯基DIC系統在活細胞觀察中能夠提供*佳分辨率或高對比度
活細胞樣品的厚度從 C.elegans之類的線蟲到單層**細胞之間變化,這就需要DIC也能隨高反差的厚樣品或幾乎不可見的薄細胞而變化。奧林巴斯提供三種DIC 系統,每種的微分間隙都不一樣。DIC 棱鏡在光通過時,微分間隙越大,則*終圖像的反差程度越大。對于厚樣品,小斷層、高分辨率裝置是非常*的。對于非常薄的樣品,帶有雙倍普通微分間隙的高反差棱鏡則非常理想。

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顯微鏡鏡體 |
物鏡轉換器 |
六孔,帶有簡易防水裝置 |
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聚焦 |
行程9mm(從載物臺表面起,向上7mm,向下2mm),同軸粗/微調節鈕(微調精度1μm,微調每圈行程100μm),上限位鎖定機構,粗調扭力矩調節器 |
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初始圖像光口 |
下光口(標準左光口,S1F*或者S8F80%,或者后下光口,2檔光路選擇)
上光口,更換內置1×/1.6×變倍器(選購件右光口或后上光口,2檔光路轉換)
底光口(選購件) |
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前置操作 |
光路選擇鈕,透射光強調節鈕和燈開關,TTL脈沖控制鈕。 |
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透射光照明器 |
100W透射光照明柱 |
IX2-ILL100 |
照明支柱傾斜裝置(30度傾角,帶有減震裝置)
聚光鏡架(行程50mm,帶有擺動裝置)
可調視場光闌,4個濾色片架(直徑45毫米,厚度=6mm或更小) |
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外接電源裝置 |
TH4-100/200 |
可提供兩種選擇(100V和200V),可使用選購件TH4-HS手動控制器,重量2.2kg |
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觀察筒 |
可變傾角雙目觀察筒 |
U-TBI90 |
35~85度,傾角連續可調(眼點高度范圍:406~471mm)
瞳間距調節范圍:50~76mm,帶有屈光度調節功能,視場數22 |
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雙目觀察筒 |
U-BI90CT |
內置調焦望遠鏡,瞳間距調焦范圍:50~76mm,帶有屈光度調節功能,視場數22 |
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U-BI90 |
瞳間距調焦范圍:50~76mm,帶有屈光度調節功能,視場數22 |
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三目觀察筒 |
U-TR30H-2 |
3個可選光路(觀察筒:三目筒=100:0, 20:80, 0:100)
瞳間距調焦范圍:50~76mm,帶有屈光度調節功能,視場數22 |
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載物臺 |
右手控制旋鈕載物臺 |
IX2-SFR |
行程:50mm(X)×50mm(Y),載物臺插入板可更換(直徑110mm) |
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左手控制短旋鈕載物臺 |
IX-SVL-2 |
行程:50mm(X)×43mm(Y),載物臺插入板可更換(直徑110mm) |
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平板載物臺 |
IX2-SP |
載物臺尺寸:232mm(X)×240mm(Y),載物臺插入板可更換(直徑110mm) |
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IX-MVR |
機械式載物臺可與IX2-SP共同使用,行程:130mm(X)×85mm(Y) |
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窄平板載物臺 |
IX2-KSP |
載物臺尺寸160mm(X)×240mm(Y),載物臺插入板可更換(直徑110mm) |
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CK40-MVR |
機械式載物臺可與IX2-KSP共同使用,行程:120mm(X)×78mm(Y) |
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滑動式載物臺 |
IX2-GS |
上層圓形載物臺可轉動360度,行程:20mm(X/Y) |
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聚光鏡 |
長工作距離聚光鏡 |
IX2-LWUCD |
5孔轉盤(其中3孔直徑30mm,2孔直徑38mm),孔徑光闌可調,N.A.0.55,W.D.27mm |
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長工作距離浮雕相襯聚光鏡 |
IX2-MLWCD |
4孔轉盤(用于直徑50mm,旋轉式浮雕相襯光學元件),孔徑光闌可調,N.A.0.5,W.D.45mm |
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超長工作距離聚光鏡 |
IX-ULWCD |
4孔轉盤(直徑29mm),孔徑光闌可調,N.A.0.3,W.D.73mm |
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浸水型DIC |
IX2-DICD+IX2-TLW |
單孔光學元件插孔(包括2個光學元件支架),40度注射器或電極插入角,孔徑光闌可調,N.A.0.9,W.D.3.7mm |
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目鏡 |
WHN10× |
高眼點,視場數22 |
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WHN10×-H |
高眼點,帶屈光度調節功能,視場數22 |
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反射光熒光裝置 |
熒光照明器 |
IX2-RFAL |
L型設計,帶有可更換的視場光闌和孔徑光闌模塊,兩個濾色片架滑板(2個位置,直徑32mm,厚度或更小) |
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IX2-RFA |
直型設計,帶有視場光闌模塊,有濾色片滑板(2個位置,直徑32mm,厚度或更小) |
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熒光濾色鏡轉盤 |
IX2-RFAC |
轉盤上有6個位置,內置光閘 |
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光源 |
100W汞燈室和變壓器,或75W氙燈室和變壓器 |
IX2系列研究級倒置顯微鏡結合UIS2光學系統,建立了熒光性能的嶄新的世界標準,能夠在超寬光譜上生成****的高質量圖象,是研究者使用活細胞儀器的*佳選擇. IX71為用戶提供高精度的溫度控制以及高剛性、高熱穩定性的實驗環境,*大限度的降低在活細胞研究中細胞損傷的風險,減少試驗時間延長造成試驗失敗的影響范圍.