随着新的荧光技术开发,光激发和操作的方法在活细胞实验中日益普及,越来越多的研究人员要求在传统的可见光谱外使用光损伤较小的近红外光谱。奥林巴斯公司在IX2系列显微镜上使用了崭新的UIS2光学系统,恰如其分地适应了这类要求。这种新型的光学系统有着极高的信噪比,在更宽的波长范围内消除色差,有着平坦的高透射率。该系统建立了全新的荧光性能标准,不必损伤细胞,就能有效地检测到微弱的荧光信号,并且优化了多色观察。IX2倒置显微镜能够在超宽光谱上生成****的高质量图像,是广大研究人员进行活细胞观察的理想选择。
超高的信噪比,能够得到*的图像
崭新的UIS2物镜的信噪比优越,高于现有物镜50%。这种物镜的新特性还包括精选了低自发荧光玻璃(通过全反射鍍膜和连接材料,显著减少了自发荧光),提高了数值孔径,增强了信号亮度。UIS2系统在弱激发光下,能够有效探测极弱荧光,从而建立了活细胞荧光成像的新标准。
高数值孔径物镜,用于荧光成像
用于UIS2系统的两种新物镜有:PLAPON60XO,它的数值孔径为1.42,*适合荧光成像;UPLSAPO100XO,适合所有用途。这两种物镜都有很高的荧光信噪比,而且都能够在45mm齐焦距下有非常好的UV激发效果。 UPLSAPO100XO能够提供直到340nm的高透过率。

信噪比更高,在荧光观察时,能够输出更明亮、反差更高的图像
为了*大程度地减小细胞损伤或荧光衰减,理想的显微镜应该在*小激发光下进行明亮的、高反差的荧光观察。为了有效检测到微弱的荧光信号,必须降低杂散光的噪音。信噪比越高,弱激发光下的观察图像越明亮、越清晰。
- 增强信号的方法

①高数值孔径的荧光物镜。
②与单独荧光波长特性相吻合的滤色片
- 降低噪声的方法

①无自发荧光的物镜
②使用不产生荧光光谱交叠的激发和发射滤色片组合。
③能阻止杂散光进入的光学系统
④能减少自发荧光的环形狭缝照明
荧光观察组件
低自发荧光高信噪比物镜 
①使用人员除了可以选择PLAPON60XO 物镜(出色的数值孔径为1.42),还可以选用大量的其它高数值孔径的物镜,这类物镜自发荧光小,精选玻璃,有助于提高信噪比。
物镜 |
数值孔径 |
工作距离(mm) |
UPLSAPO 10X |
0.40 |
3.1mm |
UPLSAPO 20X
|
0.75 |
0.6mm |
UPLSAPO 40X |
0.90 |
0.18mm |
UPLSAPO 60XO
|
1.35 |
0.15mm |
UPLSAPO 100XO
|
1.40 |
0.13mm |
PLAPON60 XO |
1.42 |
0.15mm |
UPLFLN40XO
|
1.30 |
0.2mm |
LUCPLFLN 20X
|
0.45 |
6.6 — 7.8mm |
LUCPLFLN 40X
|
0.60 |
2.7 — 4mm |
LUCPLFLN 60X |
0.70 |
1.5 — 2.2mm |
用于荧光蛋白质的高性能荧光组件 
②这一荧光激发块组件优化了ECFP/EGFP/EYFP/DsRed波长特性,能够提供高锐利的光谱分割和高透过率,可以让使用人员快速有效地从荧光蛋白中检测到荧光。即使在弱激发光下,也能进行明亮观察,从而减少了荧光衰减,也*大程度地减少了对样品的损害。
高性能干涉镀膜荧光激发块组件 
③由于采用了新的镀膜技术,激发和发射之间的间隙减少6nm,因此,某些干涉镀膜荧光激发块组件的信噪比也提高了。这类荧光激发块可有多种选择,其中包括新型的IGA型荧光激发块组件。
高性能荧光激发块

新型荧光激发块中分光镜的高锐化镀膜将激发滤色片的交叉减少到*小,并且将激发光的损失减少到传统模块的十分之一以下。与光线吸收装置(可吸收99%以上的杂散光)组合使用,能够提高信噪比,而不需要任何防止激发光损失的专用设备。
所有荧光激发块组件都带有杂散光降噪功能。
④强噪声的一个来源是非常微弱的激发光(杂散光)不经分光镜反射就发生透射。IX2系列荧光激发块组件带有可吸收99%以上这种杂散光的装置。

环形狭缝照明装置,降低了噪声/IX2-RFRS
⑤自发荧光产生于透镜中心,导致光噪声的产生。但是,这种自发荧光可以通过在反射光照明孔径光阑上放一个环形狭缝来降低。这种环形狭缝只允许激发光通过物镜孔(信噪比提高1.2到3倍)。这种装置很容易安装到IX2-RFAL上,只需要简单地更换环形狭缝装置(视场数11),就可以兼容40X、60X和 100X油镜。

Illumination |
Normal |
Annular |
SIGNAL |
408 |
479 |
NOISE |
36 |
18 |
S/N |
11.3 |
26.6
|

玻璃反射器捕捉多重染色剂荧光 
⑥多带分光镜通常用于在激发和吸收一侧使用滤色镜转盘时,获取多重染色荧光样品的多**像。但这种分光镜会碰上这样一个问题,那就是,由于染色剂数目增加,每种荧光图像都会变暗,这是因为透过光谱变窄,透过率在*好状态下也要降低到90%以下。因此,奥林巴斯公司开发了与波长无关的世界*的反射器,能够在从430nm到700nm的宽波长范围中具有94%的高透过率。与激发和发射一侧的滤色镜转盘共同使用时,就可以使用多种染色剂,更有效地捕捉荧光图像。☆ 正在申请**

大量附件,能够进行各种各样的荧光成像

荧光照明光源,明亮激发照明,用于细胞观察/操作
奥林巴斯系列荧光照明装置适合广泛的需要,包括多重染色荧光、比例法测量(Ratio)、光漂白及解笼锁(uncaging)观察。低放大倍率性能已经大为提高,金属卤化物系统带有预对中的长寿命灯泡选项。
☆1 比起传统消球差光学元件,能够更有效集光。
☆2 均匀照明,灯泡聚焦不偏移,即使改变激发光波长。
☆3 由于采用平坦光源光谱,适合多重染色荧光或比例法成像。
多种反射光荧光照明器供选择
[L形荧光照明器IX2-RFAL]
这种L形照明器比以前产品能够提供两倍亮度,带有可拆卸的孔径和视场光阑插件,还带有能准确进行灯室对中的装置,有着*大的系统灵活性。

[荧光照明器IX2-RFA]
比起以前产品,在低放大倍率下,有着2.4倍的亮度(在10X物镜下进行比较)。这种照明器对于需要强激发光的用途,或者对于低放大倍率荧光观察非常理想,内置视场光阑。

[双光室照明器/IX2-RFAW]
同时使用两个光源,观察时可以进行光增强。

[双灯室附件U-DULHA]
这一适配器允许使用人员同时加装不同类型的光源,并根据用途交替使用。
IX2-RFA用做反射光荧光照明器。
(光路选择:100/0,0/100,视场数11)

照明器模块组件
[方形视场光阑U-RFSS]
这种独特的光阑允许使用人员在视场内的任何地方控制一个荧光激发区域。例如,光漂白和光毒性能够仅**制在需要CCD成像的区域,提高了整体亮度,也延长了长时间观察的细胞的寿命。这种光阑安装在荧光照明器IX2-RFAL的视场光阑位置。

[针孔光阑IX2-RFSPOT]
这种装置能够对荧光样品提供点状光照明,对于许多实验都是很有用的,如FRAP,Uncaging等。
这种光阑安装在L形荧光照明器IX2-RFAL的视场光阑位置。
* 使用市售针孔板。
红外CCD适配器
这些低放大倍率CCD适配器安装在左侧光口,覆盖从可见光到近红外光的波长范围。

新的微分干涉(DIC)系统
诺马尔斯基DIC 显微镜的简单原理
光线穿过特殊媒介(例如,水 )中带有不同折射率的物质(例如,细胞)时,会产生相差。诺马尔斯基DIC 利用这种相差增强反差。来自显微镜光源的光的波动方向与起偏器(聚光镜侧)的光一致,当其通过聚光镜侧的DIC 棱镜时,就分为直角正交的两个束光。分裂距离称做裂劈间隙。当这两束光线通过带有不同折射率(例如,细胞)的媒介时,其中一束会发生延迟;而这两束光被 DIC 滑板(观察筒侧)和检偏镜重组时,干涉效应就会产生反差。这就是诺马尔斯基DIC 的原理。

奥林巴斯公司已经根据裂劈间隙为各种样品开发出了理想的DIC 棱镜。当DIC 反差低时,样品很难观察,由于有强烈眩光,高反差也会干扰观察。因此,奥林巴斯公司开发了三种不同类型的DIC 棱镜,能够对各种样品进行清晰的观察。
诺马尔斯基DIC系统在活细胞观察中能够提供*佳分辨率或高对比度
活细胞样品的厚度从 C.elegans之类的线虫到单层**细胞之间变化,这就需要DIC也能随高反差的厚样品或几乎不可见的薄细胞而变化。奥林巴斯提供三种DIC 系统,每种的微分间隙都不一样。DIC 棱镜在光通过时,微分间隙越大,则*终图像的反差程度越大。对于厚样品,小断层、高分辨率装置是非常*的。对于非常薄的样品,带有双倍普通微分间隙的高反差棱镜则非常理想。

显微镜镜体 |
物镜转换器 |
六孔,带有简易防水装置 |
聚焦 |
行程9mm(从载物台表面起,向上7mm,向下2mm),同轴粗/微调节钮(微调精度1μm,微调每圈行程100μm),上限位锁定机构,粗调扭力矩调节器 |
初始图像光口 |
下光口(标准左光口,S1F*或者S8F80%,或者后下光口,2档光路选择)
上光口,更换内置1×/1.6×变倍器(选购件右光口或后上光口,2档光路转换)
底光口(选购件) |
前置操作 |
光路选择钮,透射光强调节钮和灯开关,TTL脉冲控制钮。 |
透射光照明器 |
100W透射光照明柱 |
IX2-ILL100 |
照明支柱倾斜装置(30度倾角,带有减震装置)
聚光镜架(行程50mm,带有摆动装置)
可调视场光阑,4个滤色片架(直径45毫米,厚度=6mm或更小) |
外接电源装置 |
TH4-100/200 |
可提供两种选择(100V和200V),可使用选购件TH4-HS手动控制器,重量2.2kg |
观察筒 |
可变倾角双目观察筒 |
U-TBI90 |
35~85度,倾角连续可调(眼点高度范围:406~471mm)
瞳间距调节范围:50~76mm,带有屈光度调节功能,视场数22 |
双目观察筒 |
U-BI90CT |
内置调焦望远镜,瞳间距调焦范围:50~76mm,带有屈光度调节功能,视场数22 |
U-BI90 |
瞳间距调焦范围:50~76mm,带有屈光度调节功能,视场数22 |
三目观察筒 |
U-TR30H-2 |
3个可选光路(观察筒:三目筒=100:0, 20:80, 0:100)
瞳间距调焦范围:50~76mm,带有屈光度调节功能,视场数22 |
载物台 |
右手控制旋钮载物台 |
IX2-SFR |
行程:50mm(X)×50mm(Y),载物台插入板可更换(直径110mm) |
左手控制短旋钮载物台 |
IX-SVL-2 |
行程:50mm(X)×43mm(Y),载物台插入板可更换(直径110mm) |
平板载物台 |
IX2-SP |
载物台尺寸:232mm(X)×240mm(Y),载物台插入板可更换(直径110mm) |
IX-MVR |
机械式载物台可与IX2-SP共同使用,行程:130mm(X)×85mm(Y) |
窄平板载物台 |
IX2-KSP |
载物台尺寸160mm(X)×240mm(Y),载物台插入板可更换(直径110mm) |
CK40-MVR |
机械式载物台可与IX2-KSP共同使用,行程:120mm(X)×78mm(Y) |
滑动式载物台 |
IX2-GS |
上层圆形载物台可转动360度,行程:20mm(X/Y) |
聚光镜 |
长工作距离聚光镜 |
IX2-LWUCD |
5孔转盘(其中3孔直径30mm,2孔直径38mm),孔径光阑可调,N.A.0.55,W.D.27mm |
长工作距离浮雕相衬聚光镜 |
IX2-MLWCD |
4孔转盘(用于直径50mm,旋转式浮雕相衬光学元件),孔径光阑可调,N.A.0.5,W.D.45mm |
超长工作距离聚光镜 |
IX-ULWCD |
4孔转盘(直径29mm),孔径光阑可调,N.A.0.3,W.D.73mm |
浸水型DIC |
IX2-DICD+IX2-TLW |
单孔光学元件插孔(包括2个光学元件支架),40度注射器或电极插入角,孔径光阑可调,N.A.0.9,W.D.3.7mm |
目镜 |
WHN10× |
高眼点,视场数22 |
WHN10×-H |
高眼点,带屈光度调节功能,视场数22 |
反射光荧光装置 |
荧光照明器 |
IX2-RFAL |
L型设计,带有可更换的视场光阑和孔径光阑模块,两个滤色片架滑板(2个位置,直径32mm,厚度或更小) |
IX2-RFA |
直型设计,带有视场光阑模块,有滤色片滑板(2个位置,直径32mm,厚度或更小) |
荧光滤色镜转盘 |
IX2-RFAC |
转盘上有6个位置,内置光闸 |
光源 |
100W汞灯室和变压器,或75W氙灯室和变压器 |
IX2系列研究级倒置显微镜结合UIS2光学系统,建立了荧光性能的崭新的世界标准,能够在超宽光谱上生成****的高质量图象,是研究者使用活细胞仪器的*佳选择. IX71为用户提供高精度的温度控制以及高刚性、高热稳定性的实验环境,*大限度的降低在活细胞研究中细胞损伤的风险,减少试验时间延长造成试验失败的影响范围.